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細胞培養(yǎng)的原理和步驟

更新時間:2023-09-20      瀏覽次數(shù):1017

細胞培養(yǎng):

細胞培養(yǎng)是指體外模擬體內(nèi)需要的生長條件(溫度,營養(yǎng)等),然后加上一些處理條件,比如做藥物篩選,就可以做抗性基因的表達的篩選,比如還可以測定某個基因敲低或是過表達的產(chǎn)物,這個當然要結(jié)合WB來看最后基因的表達產(chǎn)物是否升高哦,細胞培養(yǎng)的應(yīng)用還有很多,歡迎大家在后臺留言。

細胞培養(yǎng)的基本原理:細胞傳代(生存空間和營養(yǎng)不足,長得太密,代謝廢物太多,要洗洗,同時也要分離出一部分細胞,要加入新的培養(yǎng)液)換液(生存空間和營養(yǎng)剩余,但是代謝廢物太多,要洗洗,要吃飯,才能長好,所以要洗和加入新鮮培養(yǎng)基)凍存(太多了,先存起來,液氮里面里就是低溫,保存能量,活得久)

復(fù)蘇(解凍,恢復(fù)吃飯的能力,恢復(fù)生長)

胞培養(yǎng)的基本步驟(一定要明白每個步驟的意義和目的):

01細胞傳代(貼壁細胞):

試劑:PBSPBS緩沖液),胰酶,含血清的培養(yǎng)基;

流程:顯微鏡下看一看培養(yǎng)皿里的細胞多不多,太多(80%~90%)會導(dǎo)致代謝廢物很多,先吸掉廢液,再用PBS洗一洗,同時太多會導(dǎo)致細胞黏在一起,這時候就需要加點胰酶消除它們之間的粘性,是否消除完,在顯微鏡下看一看,看完加入適宜的含血清的培養(yǎng)基,中和一下胰酶,這叫吹打,除此之外,細胞太多了,把一部分細胞移出來,加入適量的培養(yǎng)基放入孵箱繼續(xù)培養(yǎng),這叫傳代。

02細胞換液:

試劑:PBS,含血清的培養(yǎng)基;

流程:先吸掉代謝廢物(即細胞瓶中的培養(yǎng)液),再用PBS洗一洗,由于細胞長得不是很多,細胞之間沒有黏在一起,因此不需要加入胰酶來消除它們之間的粘性。由于細胞要吃飯,加入新鮮的含血清的培養(yǎng)基,最后放到孵箱里面進行培養(yǎng)。

03細胞凍存:

試劑:凍存液,PBS,胰酶,含血清的培養(yǎng)基;

流程:要凍存,先配置凍存液,凍存液包含了:DMSO:防止在低溫(零度以下至-196℃)保存細胞時,細胞內(nèi)液會形成冰晶,滲透壓會發(fā)生改變,細胞結(jié)構(gòu)會出現(xiàn)紊亂,會導(dǎo)致細胞出現(xiàn)損傷。凍存液制備時,一般需與血清一起配置:因為兩者互融時,會散發(fā)熱量,所以凍存液需提前制備。

為細胞太多了,需要凍存,所以要先看一看,吸一吸,洗一洗,分一分,中和一下,吹打制成細胞懸液,離心,吸掉上清液,加入凍存液,輕輕吹吸均勻,每管等量1ml裝入凍存管,4℃20min,-20℃30min,-80℃過夜,最后放入液氮罐。

04細胞復(fù)蘇:

試劑:含血清的培養(yǎng)基;

流程:從液氮中取出凍存管,迅速(小于3min)置于37℃水浴鍋中,解凍時,邊晃動邊觀察,當看到只有一小塊冰存在時,即可從水浴鍋中取出,打開凍存管,迅速將細胞懸液吸到離心管中,輕輕混勻,1000r/min,離心五分鐘,吸掉上清液,沉淀中加入適量培養(yǎng)液,放入孵箱中,培養(yǎng)。還有就是:復(fù)蘇的細胞,需要在24小時后,換一次培養(yǎng)液

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